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ｐENTR-promoter プラスミドの作成原理図　プロモーター付加遺伝子の作成原理

手持ちの遺伝子をGatewayシステムのベクターに載せる方法には２種類が考えられます。

方法１）MyGeneを含む手持ちのプラスミドにattR1-ccdB-attR2カセット（Rf cassette）をライゲーションにより結合する。Rf cassetteはインビトロジェン社から「Gateway vector conversion system」(cat. 11828-019)として販売されています。
（注）この場合、手持ちのプラスミドが線虫で働く3'制御領域（ポリA付加シグナル等）を持っている必要があります。

方法２）MyGeneを制限酵素等で切り出し、ｐPD-DESTベクターのmulticloning site (MCS)にライゲーションでつなぐ。pPD-DESTはAndy FireによるpPDプラスミドにRf cassetteを挿入したものです。いくつかの種類を用意しています。

（注）作成されるプラスミドはccdB配列を含むので、通常の大腸菌では増えません。DB3.1（インビトロジェン cat. 11782-018）等のgyrA株に形質転換してください。